液相色譜儀的操作過程

液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動(dòng)相，稱為經(jīng)典液相色譜法，此方法柱效低、時(shí)間長（常有幾個(gè)小時(shí)）。液相色譜法(HighperformanceLiquidChromatography，HPLC)是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會(huì)引起高阻力，需用高壓輸送流動(dòng)相，故又稱高壓液相色譜法(HighPressureLiquidChromatography，HPLC)。又因分析速度快而稱為高速液相色譜法(HighSpeedLiquidChromatography，HSLP)。也稱現(xiàn)代液相色譜。

液相色譜儀的操作過程如下：

  　1.  翻開HPLC工作站（包含計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀），銜接好活動(dòng)相管道，銜接檢測體系。

　  2. 對(duì)抽濾后的活動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。

　　3.過濾活動(dòng)相，根據(jù)需求挑選不一樣的濾膜。

　　4進(jìn)入HPLC操控界面主菜單，點(diǎn)擊manual，進(jìn)入手動(dòng)菜單。

　　5. 有一段時(shí)刻沒用，或許換了新的活動(dòng)相，需求先沖刷泵和進(jìn)樣閥。沖刷泵，直接在泵的出水    口，用針頭抽取。沖刷進(jìn)樣閥，需求在manual菜單下，先點(diǎn)擊purge，再點(diǎn)擊start，沖刷時(shí)速度不要超越10ml/min。

　　6. 調(diào)理流量，初度運(yùn)用新的活動(dòng)相，能夠先試一下壓力，流速越大，壓力越大，通常不要超越2000。點(diǎn)擊injure，選用適宜的流速，點(diǎn)擊on，走基線，調(diào)查基線的狀況。

　　7. 規(guī)劃走樣辦法。點(diǎn)擊file，選擇select?users?and?methods，能夠選擇現(xiàn)有的各種走樣辦法。若需樹立一個(gè)新的辦法，點(diǎn)擊new?method。選擇需求的配件，包含進(jìn)樣閥，泵，檢測器等，根據(jù)需求而不一樣。選完后，點(diǎn)擊protocol。一個(gè)完整的走樣辦法需求包含：a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流，通常2-5分鐘；b.基線歸零；c.進(jìn)樣閥的loading-inject變換；d.走樣時(shí)刻，隨不一樣的樣品而不一樣。

　　8. 進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣辦法，點(diǎn)擊start。進(jìn)樣，一切的樣品均需過濾。辦法走完后，點(diǎn)擊postrun，可記載數(shù)據(jù)和做符號(hào)等。悉數(shù)樣品走完后，再用上面的辦法走一段基線，洗掉剩余物。

　　9 關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)計(jì)算機(jī)，再關(guān)液相色譜。

液相色譜儀的分離方法：

色譜法的分離原理是：

溶于流動(dòng)相(phase)中的各組分經(jīng)過固定相時(shí)，由于與固定相(stationaryphase)發(fā)生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從定相中流出。又稱為色層法、層析法。

色譜法zui早是由俄國植物學(xué)家茨維特（Tswett）在1906年研究用碳酸鈣分離植物色素時(shí)發(fā)現(xiàn)的，色譜法(Chromatography)因之得名。后來在此基礎(chǔ)上發(fā)展出紙色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法。